产品货号:
WE0293
中文名称:
SDS-PAGE胶制备试剂盒
英文名称:
SDS-PAGE Gel Kit
产品规格:
40~60gels|200~300gels
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒包括SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂,只需自备蒸馏水,即可制备高质量各种浓度的变性PAGE凝胶,方便、快捷。本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。
组分 | 40~60gels | 200~300gels |
30% Acr-Bis(29:1) | 100mL | 2×250mL |
SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×) | 100mL | 500mL |
SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×) | 50mL | 250mL |
APS | 0.5g | 2.5g |
TEMED | 1mL | 5mL |
保存:2~8℃
本制品所提供的APS(过硫酸铵)为固体粉末,使用前加入纯水溶解即配制成10%APS溶液(0.5g APS加5mL纯水、2.5g APS加25mL纯水),将溶液分装后置于-20℃保存,通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。
- 10%APS配制后分装-20度保存。APS溶液不稳定,应尽量减少室温存放时间,每次取用后立即放回冰箱,以防失效;若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10%APS。
- PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关;在其它条件不变的情况下,可通过改变APS及TEMED的用量,控制PAGE凝胶的聚合速度,凝胶聚合过快不利于操作;附表中的APS及TEMED量可供参考,应根据实际操作情况做适当的调整。
- 在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
- 在分离胶上层加纯水时要小心操作,加水时速度不能太快。
- 丙烯酰胺具有神经毒性,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
- 本制品仅用于科研,不能用于人体实验或人体治疗。
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度,最佳胶浓度请参考附表1。
- 灌制分离胶
各试剂使用量请参考附表2- 参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
注:加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触,是否加入上层筛板可根据实际情况选择。 - 将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer和纯水在小烧杯或试管中混合。
- 加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
- 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1cm的水层,使凝胶表面保持平整。
- 静置30~60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
- 参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
- 灌制浓缩胶
各试剂使用量请参考附表3- 去除覆盖在分离胶上的水层。
- 将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
- 加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
- 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
- 将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
- 静置10~20分钟,等待浓缩胶聚合。
- 待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。
- 进行常规电泳操作。
- 去除覆盖在分离胶上的水层。
附表1.SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围
SDS-PAGE分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6%胶 | 50~150kD |
8%胶 | 30~90kD |
10%胶 | 20~80kD |
12%胶 | 12~60kD |
15%胶 | 10~40kD |
附表2.配制SDS-PAGE分离胶
分离胶浓度 | 凝胶体积 | 所需各组分体积(单位:ml) | ||||
纯水 | 30%Acr-Bis(29:1) | SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×) | 10%APS | TEMED | ||
6% | 5mL | 2.75 | 1.0 | 1.25 | 0.05 | 0.004 |
10mL | 5.5 | 2.0 | 2.5 | 0.1 | 0.008 | |
15mL | 8.25 | 3.0 | 3.75 | 0.15 | 0.012 | |
20mL | 11 | 4.0 | 5 | 0.2 | 0.016 | |
8% | 5mL | 2.42 | 1.33 | 1.25 | 0.05 | 0.003 |
10mL | 4.8 | 2.7 | 2.5 | 0.1 | 0.006 | |
15mL | 7.25 | 4.0 | 3.75 | 0.15 | 0.009 | |
20mL | 9.7 | 5.3 | 5 | 0.2 | 0.012 | |
10% | 5mL | 2.08 | 1.67 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
10mL | 4.17 | 3.33 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
15mL | 6.25 | 5.0 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
20mL | 8.3 | 6.7 | 5 | 0.2 | 0.008 | |
12% | 5mL | 1.75 | 2.0 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
10mL | 3.5 | 4.0 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
15mL | 5.25 | 6.0 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
20mL | 7.0 | 8.0 | 5 | 0.2 | 0.008 | |
15% | 5mL | 1.25 | 2.5 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
10mL | 2.5 | 5.0 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
15mL | 3.75 | 7.5 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
20mL | 5 | 10.0 | 5 | 0.2 | 0.008 |
附表3.配制5%SDS-PAGE浓缩胶
凝胶体积 | 所需各组分体积(单位:ml) | ||||
纯水 | 30%Acr-Bis(29:1) | SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×) | 10%APS | TEMED | |
2mL | 1.14 | 0.34 | 0.5 | 0.02 | 0.002 |
4mL | 2.28 | 0.68 | 1 | 0.04 | 0.004 |
6mL | 3.42 | 1.02 | 1.5 | 0.06 | 0.006 |
8mL | 4.56 | 1.36 | 2 | 0.08 | 0.008 |
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